Dažni klausimai ir atsakymai ruošiant guanidino tiocianato tirpalą

Guanidino tiocianatas yra stiprus baltymų denatūrantas. Jis gali ne tik greitai ištirpinti baltymus, sukelti ląstelių struktūros suskaidymą ir greitai atskirti branduolinius baltymus nuo nukleino rūgščių dėl antrinės struktūros sunaikinimo, bet ir turi stiprų denatūruojantį poveikį RNazes. Todėl guanidino tiocianatas gali būti naudojamas kaip denatūrantas ląstelėms lizuoti, RNR atskirti nuo baltymo ir RNR išleisti į tirpalą. Tačiau ruošiant ir naudojant guanidino tiocianato tirpalą dažnai susiduriama su tam tikromis problemomis. Šis straipsnis atsakys į šias problemas po vieną.

Ar dabar reikia naudoti ir paruošti guanidino tiocianato tirpalą?

Galutinė guanidino tiocianato koncentracija buvo 4 m, kaip pavyzdys: 42 mm natrio citratas, 0,83% n-laurilsarkozinas (natrio dodecilas, n-metilglicinas), 0,2 mm ²-CSB buferio paruošimas iš merkaptoetanolio; 25 g guanidino tiocianato ir 33 ml CSB buferinio tirpalo maišoma, kol visiškai ištirps. Denatūruotą tirpalą galima paruošti kaitinant ir ištirpinant 65 ° C temperatūroje℃ ir saugomas 4 val℃ budėjimo režimui.

Todėl šiuo metu guanidino tiocianato tirpalo naudoti ir paruošti nereikia, o šiuo metu rinkoje yra įvairių koncentracijų tirpalų, tačiau saugojimo laikas nėra lengvas ir gali būti per ilgas, nes priešingu atveju susidarys krituliai. prieš naudojimą atidžiai patikrinkite; Be to, jei vienkartinio paruošimo per daug, rekomenduojama perpakuoti.

Ar paruošus guanidino tiocianato tirpalą reikia sterilizuoti?

Nebūtina sterilizuoti guanidino tiocianato tirpalo, kuris nėra labai stabilus, o 0,1% DEPC vanduo paprastai naudojamas su pirolizės tirpalu, o vanduo buvo sterilizuotas. Be to, visi RNR ekstrahavimo reagentai turi būti paruošti DEPC vandeniu, o reagentas turėtų būti atidarytas ir naudojamas tik RNR.

Nors paruošto lizato nereikia sterilizuoti, reikia pažymėti, kad eksperimente naudojami plastikiniai gaminiai buvo pažymėti be RNazės. Jei jie nebuvo atidaryti naudojimui, juos galima naudoti tiesiogiai. Kiti turi būti apdoroti: įpilkite DEPC į dvigubai distiliuotą vandenį, kad jo galutinė koncentracija būtų 0,1%, įmirkykite jame plastikinius gaminius, išvėdinkite virtuvę per naktį, tada sandariai uždarykite juos aliuminio folija, sterilizuokite aukštoje temperatūroje ir aukštu slėgiu mažiausiai 30 min., sausa ir budėjimo režimu.